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本试剂盒采用优化的缓冲体系和进口高性能硅胶柱纯化技术，可从各种浓度的TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收100bp～40kb的DNA片段，也可直接从PCR产物、酶促反应体系或其它各种方法获得的DNA粗制品中纯化DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。纯化的DNA可直接用于连接、转化、酶切、体外转录、PCR、测序、微注射等分子生物学研究。

• 第一次使用前按漂洗液WB试剂瓶标签所示，加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，避免多次加入，然后置于室温保存。
  
• DNA结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
  
• 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟使其恢复澄清。
  使用前应该恢复到室温。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
  
• 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。若需要提高DNA回收率，推荐使用平衡液先平衡吸附柱。
  
• 对于>10kb的DNA片段可以适当增加吸附和洗脱时间。
  
• 将洗脱液EB或ddH2O加热至65～70℃，有利于提高DNA洗脱效率。

• 琼脂糖凝胶DNA回收
  
  • DNA电泳结束后，在紫外灯下用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。
    
    • 将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶溶化时间从而提高回收率（线型DNA长时间暴露在高温条件下易于水解）。勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。
  • 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5mL离心管，称重。
    
    • 先称一个空1.5mL离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。
  • 加3倍体积DNA结合液。
    
    • 如果凝胶重为100mg，其体积可视为100μL，则加入300μL溶胶液。
      
    • 如果凝胶浓度>2%，应加入6倍体积溶胶液。
  • 56℃水浴放置10min（或直至胶完全溶解）。每2～3min涡旋震荡一次加速溶解，确保凝胶块完全溶解。
    
    • 凝胶块必须完全溶化，否则将严重影响DNA回收率。
  • （可选）当回收<300bp DNA片段时，按每100mg最初的凝胶重量补加150μL异丙醇。如果凝胶浓度>2%，则按每100mg最初的凝胶重
    量补加300μL异丙醇，震荡混匀。
    
  • （可选）将吸附柱置于收集管中，加入100μL平衡液至吸附柱膜上。12000rpm离心1min，弃收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中。
    
    • 如果吸附柱放置时间过长、暴露于空气时间过久或者回收率偏低时，推荐采用此步。平衡液处理过的柱子应当天使用，放置时间过长会影响效果。
  • 将≤750μL溶胶液转移至吸附柱中，室温静置1min，12000rpm离心30~60 s。弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
    
    • 如果溶胶液>750μL，则按每次750μL加入至同一个吸附柱中，重复步骤7。
      
    • 过滤下的DNA结合液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后，溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色，此为酚红pH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。
  • 加入600μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30~60 s，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
    
    • 请沿吸附柱壁四周加入漂洗液WB，或加入漂洗液WB后盖盖颠倒混匀2～3次，有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。
  • 重复步骤8。
    
  • 12000rpm离心2min干燥吸附柱，目的是将吸附柱中残留的漂洗液WB彻底去除。
    
  • 将吸附柱置于一个新的无菌1.5mL离心管中。在吸附膜的中间部位加入50μL洗脱液EB。室温静置2min，12000rpm离心1min洗脱DNA。
    
    • 洗脱体积不应少于25μL，低于25μL会导致洗脱效率下降。若需要获得最高产量，建议将洗脱液EB预热至65～70℃以提升回收效率。此外可以将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤11进行二次洗脱。若后续做测序需使用ddH2O洗脱，并确保ddH2O的pH在7.0～8.5范围内，pH低于7.0会降低洗脱效率。
  • 弃去吸附柱，DNA产物保存于-20℃，以防止DNA降解。
• 反应液DNA回收
  该方案适用于PCR产物或酶切产物等DNA纯化。
  
  • 短暂离心PCR产物或酶切产物。用移液枪测量其体积，并转移至灭菌的1.5mL或2mL离心管中。若样品体积<100μL，需用ddH2O补充至100μL。
    
  • 按每100μL产物加入500μL DNA结合液，颠倒或涡旋混匀。
    
  • 将上一步所得溶液按照≤750μL转移至吸附柱中，室温静置1min，12000rpm离心30~60 s。弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
    
    • 如果溶胶液>750μL，则按每次750μL加入至同一个吸附柱中，重复步骤3。
  • 后续步骤按“琼脂糖凝胶DNA回收”第8～12步进行操作。

• DNA回收率低
  
  • 琼脂糖凝胶未完全溶化：尽可能去除不含目的片段的琼脂糖凝胶，溶胶过程间隔性的颠倒混匀促进凝胶充分溶化，仔细检查确保无固体琼脂糖凝胶残留。
    
  • 回收片段过小：<300bp片段时，需补加0.5倍DNA结合液体积的异丙醇。
    
  • 试剂准备有误：漂洗液WB需加入乙醇稀释或乙醇体积不准确(乙醇浓度需控制在80%)。
    
  • 洗脱效率低：将洗脱液EB预热至65～70℃，并重复二次洗脱。
    
  • 回收DNA初始样本量过高：降低DNA回收初始样本量或者吸附柱使用前先用平衡液平衡柱子。
• 下游结果不理想
  
  • 盐污染：确保用漂洗液WB洗脱两次；此外沿吸附柱管壁四周加入漂洗液WB，或加入漂洗液WB后盖盖颠倒混匀2～3次有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。
    
  • 琼脂糖凝胶残留：尽可能去除不含目的片段的琼脂糖凝胶，溶胶过程间隔性的颠倒混匀促进凝胶充分溶化，仔细检查确保无固体琼脂糖凝胶残留。
    
  • 洗脱产物中有单链DNA：将洗脱产物95℃加热2min，缓慢冷却至室温，使单链DNA重新退火即可。